*的紫外-可見分光光度計(jì)生產(chǎn)廠家有上百家，產(chǎn)品型號成千上萬，但就基本結(jié)構(gòu)來說，都是由五個(gè)部分組成，即光源、單色器(單色儀)、吸收池、檢測器和信號指示系統(tǒng)。如下所示：

　　光源

　　對光源的基本要求是：應(yīng)在儀器操作所需的光譜區(qū)域內(nèi)能夠發(fā)射連續(xù)輻射;有足夠的輻射強(qiáng)度和良好的穩(wěn)定性，而且輻射能量隨波長的變化應(yīng)盡可能小。紫外-可見分光光度計(jì)中常用的光源有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。熱輻射光源用于可見光區(qū)。如鎢絲燈和鹵鎢燈;氣體放電光掉用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。

　　鎢燈和碘鎢燈可使用的范圍在340～2500nm，這類光源的輻射能量與施加的外加電壓有關(guān)，在可見光區(qū)，輻射的能量與工作電壓的4次方成正比。光電流也與燈絲電壓的n次方(n>l)成正比。因此必須嚴(yán)格控制燈絲電壓，儀器必須備有穩(wěn)壓裝置。

　　在近紫外區(qū)測定時(shí)常用氫燈和氘燈，它們可在160～375nm范圍內(nèi)產(chǎn)生連續(xù)光源。氘燈的燈管內(nèi)充有氫的同位素氘，它是紫外光區(qū)應(yīng)用zui廣泛的一種光源，其光譜分布與氫燈類似，但光強(qiáng)度比相同功率的氫燈要大3～5倍。

　　單色器

　　單色器是能從光源輻射的復(fù)合光中分出單色光的光學(xué)裝置，其主要功能應(yīng)該是能夠產(chǎn)生光譜純度高且波長在紫外可見區(qū)域內(nèi)任意可調(diào)的單色光。單色器一般由入射狹縫、準(zhǔn)直鏡(透鏡或凹面反射鏡使入射光成平行光)、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等幾部分組成。其核心部分是色教元件，起分光的作用。單色器的性能直接影響人射光的單色性，從而也影響到測定的靈敏度、選擇性及校準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系等。

　　能起分光作用的色散元件主要是棱鏡和光柵。棱鏡常用的材料有玻璃和石英兩種。它們的色散原理是依據(jù)不同波長光通過棱鏡時(shí)有不同的折射率而將不同波長的光分開。由于玻璃可吸收紫外光，所以玻璃棱鏡只能用于350～3200nm的波長范圍，即只能用于可見光區(qū)域內(nèi)。石英棱鏡適用的波長范圍較寬，可從185～4000nm，即可用于紫外、可見、近紅外三個(gè)光域。

　　光柵是利用光的衍射與干涉原理制成的。它可用于紫外、可見及近紅外光域，而且在整個(gè)波長區(qū)具有良好的、幾乎均勻一致的分辨能力。它具有色散波長范圍寬、分辨本領(lǐng)高、成本低、便于保存和易于制備等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是各級光譜會重疊而產(chǎn)生干擾。

　　入射、出射狹縫，透鏡及準(zhǔn)直鏡等光學(xué)元件中狹縫在決定單色器性能上起重要作用。狹縫的大小直接影響單色光純度，但過小的狹縫又會減弱光強(qiáng)。

　　吸收池

　　吸收池用于盛放分析試樣，一般有石英和玻璃材料兩種。石英池適用于可見光區(qū)及紫外光區(qū)，玻璃吸收池只能用于可見光區(qū)。為減少光的反射損失，吸收池的光學(xué)面必須*垂直于光束方向.在高精度的分析測定中(紫外區(qū)尤其重要),吸收池要挑選配對。因?yàn)槲粘夭牧系谋旧砦馓卣饕约拔粘氐墓獬涕L度的精度等對分析結(jié)果都有影響。

　　檢測器

　　檢測器的功能是檢測光信號、測量單色光透過溶液后光強(qiáng)度變化的一種裝置，常用的檢測器有光電池、光電管和光電倍增管等。它們通過光電效應(yīng)將照射到檢測器上的光信號轉(zhuǎn)變成電信號。對檢測器的要求是：在測定的光譜范圍內(nèi)具有高的靈敏度;對輻射能量的響應(yīng)時(shí)間短，線性關(guān)系好;對不同彼長的輻射響應(yīng)均相同，且可靠;噪音低，穩(wěn)定性好等。

　　硒光電池對光的敏感范圍為300～800nm，其中又以500～600nmzui為靈敏。這種光電池的特點(diǎn)是能產(chǎn)生可直接推動微安表或檢流計(jì)的光電流，但由于容易出現(xiàn)疲勞效應(yīng)而只能用于低檔的分光光度計(jì)中。

　　光電管在紫外-可見分光光度計(jì)上應(yīng)用較為廣泛。它的結(jié)構(gòu)是以一彎成半圓柱形的金屬片為陰極，陰極的內(nèi)表面涂有光敏層，在圓柱形的中心置一金屬絲為陽極.接受陰極釋放出的電子。兩電極密封于玻璃或石英管內(nèi)并抽成真空。陰極上光敏材料不同，光譜的靈敏區(qū)也不同。可分為藍(lán)敏和紅敏兩種光電管，前者是在鎳陰極表面上沉積銻和艷，可用于波長范困為210～625nm;后者是在陰極表面上沉積了銀和氧化艷。可用范圍為625～1000nm。與光電池比較，它有靈敏度高、光敏范圍寬、不易疲勞等優(yōu)點(diǎn)。

　　光電倍增管是檢測微弱光zui常用的光電元件，它的靈敏度比一般的光電管要高200倍，因此可使用較窄的單色器狹縫，從而對光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)有較好的分辨能力。

　　信號指示系統(tǒng)

　　它的作用是放大信號并以適當(dāng)方式指示或記錄下來。早期常用的信號指示裝置有直讀檢流計(jì)、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動紀(jì)錄裝置等。現(xiàn)在很多型號的分光光度計(jì)都可配套計(jì)算機(jī)使用，一方面可對分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制，另一方面可進(jìn)行數(shù)據(jù)處埋。

　　2.紫外-可見分光光度計(jì)的分類

　　紫外-可見分光光度計(jì)的類型很多，但可歸納為三種類型：單光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長分光光度計(jì)。

　　單光束分光光度計(jì)

　　其光路示意圖如前圖(紫外-可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)圖)所示，經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶掖，以進(jìn)行吸光度的測定。這種類型的分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)簡單，操作方便，維修容易，適用于常規(guī)分析。國產(chǎn)722型，751型、724型、英國SP500型以及 BackmanDU-8型等均屬于此類光度計(jì)。

　　雙光束分光光度計(jì)

　　其光路示意如下圖所示，經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡(M1)分解為弧度相等的兩束光，一束通過參比池，另一束通過樣品池。光度計(jì)能自動比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計(jì)一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時(shí)分別通過參比池和樣品他，還能自動消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。這類儀器有國產(chǎn)710型、730型和740型，日立220系列，島津-210，英國UNICAMSP-700等等。

　　雙波長分光光度計(jì)

　　其基本光路如下圖所示。由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長的單色光;再利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，zui后由顯示器顯示出兩個(gè)波長處的吸光度差值ΔA(ΔA=A1-A2)。

　　雙波長分光光度計(jì)的優(yōu)點(diǎn)：對于多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)的分析，以及存在背景于擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計(jì)，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。通過光學(xué)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換，使雙波長分光光度計(jì)能很方便地轉(zhuǎn)化為單波長工作方式。如果能在兩波長處分別記錄吸光度隨時(shí)間變化的曲線，還能進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)研究。